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细胞培养全攻略

人阅读 发布时间:2021-09-19 19:17

RAW264.7属贴壁细胞,最-好的形态呈现为小而圆、透亮,但其也极易出现伪足的细胞形态,这也是大家细胞总是养不好、消化传代困难的根源,同时也是实验数据不理想的罪魁祸首。除此之外,细胞生长缓慢、贴壁困难,也是大家在养细胞过程中出现的最常见问题,今天小翌就来给大家整理一份RAW264.7细胞培养最全攻略!!!
 

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▲ 图源Pixabay

 

Part Ⅰ 概 述 RAW264.7中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤,是常用的炎症细胞模型之一,常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。

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▲ 图源Pixabay

 

Part Ⅱ 细胞的形态与特点 

RAW264.7细胞具有强吞噬能力,细胞在吞噬抗原后释放趋化因子,促使细胞分化出伪足,因此造成细胞极难消化。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都易促使细胞呈现梭形,造成最终实验数据不理想。

有时细胞看起来一切正常,但却生长缓慢,究其原因多半是感染了支原体,支原体感染导致生长变慢、状态变差,虽不会马上致死,但会影响其机体内的各种参数,且难以被观察到,是影响细胞状态的隐形杀手。

 

Part Ⅲ 针对性解决方案 

在日常培养过程中发现RAW264.7细胞容易出现的问题主要为以下几种:1.复苏不易成功2.细胞形态变异明显3.消化困难4.细胞生长缓慢,当你的细胞培养遇到上述瓶颈,不妨试一试以下几种解决办法。

 

1 复苏难以成功

原因:RAW264.7对空间十分敏感,复苏密度太高,细胞增殖太快,加剧细胞营养缺失,加速细胞老化。

解决办法:T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~105

2  细胞变异明显

原因:细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促使该细胞呈现梭形、长梭形

解决办法:改善细胞培养环境,例如与细胞接触的玻璃器皿均高温灭菌,换flask培养瓶,采用一次性器具,使用质量较高的胎牛血清

消化困难

原因:细胞老化后,细胞伪足多且长,使细胞难消化,使用胰酶或细胞刮会对细胞损伤较大

解决办法:无需胰酶使用吸管重复吹打,可消化大部分正常状态的细胞;但若细胞为“长脚”状态,即使加入胰酶消化超过10min,也难以消化下来,勉强消化,对后续的实验数据也有较大影响。

生长缓慢

原因:支原体污染会导致细胞生长缓慢,甚至难以贴壁

解决办法:定期进行支原体检测(如翌圣生物一步法恒温支原体检测试剂),如发现支原体污染,即刻使用支原体去除试剂(如翌圣生物MycAwayTM 支原体去除试剂

 

Part Ⅳ 精品推荐 ▍  Yeasen 40612 要一步法即可检测支原体的存在Yeasen一步法恒温支原体检测试剂采用独有的等温扩增技术,在颜色判别方面具有更强的辨识度,由蓝紫色(阴性)向天蓝色阳性)的变,更利于肉眼的判别,增加了防污染组分,杜绝假阳性现象的存在

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▲ 图1.一步法支原体检测操作流程

▍  结果是阳性,别怕!Yeasen 40607 帮你搞定MycAwayTM 支原体去除试剂(1000×)是一种混合制剂,可通过抑制 DNA 和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果且对细胞无伤害,最-大程度上挽救您的细胞,减少因支原体污染带来的损失。
春2.jpg
去除前
春3.jpg
去除后

▲ 图2.Yeasen MycAwayTM 支原体去除效果的展示

 

▍  支原体去除试剂的特点

» 毒性低:对细胞毒性小,不影响后续细胞实验,如细胞活力检测和细胞转染等;

» 稳定性强:-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用;

» 操作简单:只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可;

» 起效快:最快3天即可见效;

» 去除范围广:能去除实验室绝大多数支原体类型。           春4.jpg 春5.jpg

▲ 图3.支原体去除试剂细胞毒性检测图示

 

Part Ⅴ 相关产品 

限时线下促销正在进行,详情请咨询当地销售

 

类别

产品

货号

规格

支原体检测

GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit   GMyc-PCR支原体检测试剂盒

40601ES10/20

10/20 assays

MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒

40612ES25/60

25/100T

支原体
去除试剂

MycAway™ Spray (Ready-to-use)  支原体喷雾剂(即用型)

40605ES02/03

1 / 2×500 mL

MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent  MycAway™ 支原体去除试剂(1000×)

40607ES03/08

1/ 5×1mL

支原体
预防试剂

MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原体预防试剂(2000×)

40608ES03/08

1/5×1 mL

MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士

40609ES60

100 mL

MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 

水浴锅2号消毒卫士

40610ES60

100 mL


最后就是小翌发福利的时候啦,关注翌圣公众号,回复消息支原体即可免费领取支原体检测试剂试用装哦,赶紧行动吧!
 

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