——Yeasen TUNEL detection Kit 让“美”原位呈现

通过TdT转移酶将Fluorescein-dUTP结合到有缺口的DNA上是检测细胞凋亡的常用方法之一，如Roche提供的In Situ Cell Death Kit正是基于这个原理。产品中的TdT转移酶活性直接影响到标记的效率。翊圣生物立足于酶制剂生产，力求开发以酶制剂为基础的最具性价比产品，推出三款荧光素（Alexa Fluor 640，Alexa Fluor 488，FITC）标记的Tunel检测试剂，在满足客户对产品高品质要求的同时又可以享受低至Roche一半的价格。

目前已经有超过120个课题组正在使用该产品，并在权威杂志上发表多篇英文文章，如Theranostics和EMBO Molecular Medicine等。

 

检测机理：

 

细胞凋亡晚期，染色体DNA双链断裂或单链断裂产生大量的粘性3-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移（TdT）的作用下，将荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3-末端，从而可通过检测荧光完成对细胞凋亡的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling,TUNEL），原理见图1。

图1：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）原理图

 

产品特点:

 

适用范围广：可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞。

检测灵敏度高：可检测出极少量的凋亡细胞。

背景干扰小：信噪比高。

观察多样性：荧光显微镜观察，流式检测。

 

数据展示：

 

1、小鼠前脂肪细胞（3T3-L）Tunel检测

 

图2：小鼠前脂肪细胞3T3-L凋亡检测。第一行代表阴性对照，第二行代表阳性对照。

检测试剂：Cat No. 40306 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

 

2、石蜡切片样本的Tunel检测

 

图3：在皮下移植瘤模型中，单独使用LY3009120或联合使用Vemurafenib和Obatoclax可以有效延缓甲状腺癌。IF=8.8

样本类型：石蜡包埋的肿瘤组织（取自裸鼠）。检测试剂：Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488)。

 

3、细胞爬片的Tunel检测

 

图4：硫酸锌对不同分组的内皮细胞凋亡的影响 

样本类型：HUVEC（人脐静脉内皮细胞）。检测试剂：Cat No. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)

 

4、流式细胞术检测细胞凋亡

 

图5：PA处理可以有效降低重编程（reprogramming）过程中凋亡的发生。IF=3.7

样本类型：iPS Cells。检测试剂：Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488)。

 

文献引用：

 

[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. Porous Se@ SiO2 nanocomposite promotes migration and osteogenic differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cell to accelerate bone fracture healing in a rat model[J]. International Journal of Nanomedicine, 2019, 14: 3845. (IF 4.76)

[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Protective effects of hydroxysafflor yellow an on high oxidized low density lipoprotein induced human coronary artery endothelial cells injuries[J]. Development, 2019, 22: 581-589.(IF 6.208 )

[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. MicroRNA-205 is associated with diabetes mellitus‐induced erectile dysfunction via down-regulating the androgen receptor[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(5): 3257-3270.(IF 4.41)

[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC regulates programmed necrosis and myocardial ischemia/reperfusion injury through the inhibition of mPTP opening[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(IF 8.37)

[5] Li P, Hao L, Guo Y Y, et al. Chloroquine inhibits autophagy and deteriorates the mitochondrial dysfunction and apoptosis in hypoxic rat neurons[J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(IF 3.40)

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[8] Han Y Q, Ming S L, Wu H T, et al. Myostatin knockout induces apoptosis in human cervical cancer cells via elevated reactive oxygen species generation[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(IF 8.37)
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[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Gd3+-Ion-induced carbon-dots self-assembly aggregates loaded with a photosensitizer for enhanced fluorescence/MRI dual imaging and antitumor therapy[J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(IF 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 I-labeled copper sulfide-loaded microspheres to treat hepatic tumors via hepatic artery embolization[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(IF 8.12 )

 

常见问题：

 

Q:出现非特异性荧光标记？

 

1）组织/细胞本身核酶或聚合酶活性水平较高，易导致出现非特异性的荧光标记，例如平滑肌细胞。解决方法是，取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。
2）使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液，导致出现假阳性。建议采用新鲜配置的4%中性对聚甲醛固定液。
3）TUNEL检测反应时间过长，细胞或组织表面不能保持湿润，也可能出现非特异性荧光。注意控制反应时间，并确保TUNEL检测反应液能很好地覆盖样品。
 

Q:荧光背景很高？

 

1）高速分裂和增殖的细胞，转录水平高，有时也会出现细胞核中的DNA断裂。
2）在激发光下长时间的暴露，导致假阳性的出现。

 

Q:标记效率低？

 

1）使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。

2）固定时间过长，导致交联程度过高。此时宜减少固定时间。
3）组织切片过厚，使得固定效果不理想，最好控制在10 μm以内。

4）荧光淬灭。Fluorescence在普通光照10min就会严重淬灭。解决方法是需注意避光操作。

 

产品选购：

 

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