Apoptame-caspase细胞凋亡抑制剂

Apoptame

用途：用于细胞培养和低温储存的泛-caspase细胞凋亡抑制剂

描述：

在进行原代细胞培养过程中，细胞将会受到多种能够促进凋亡的物理和生理上的压力刺激。在细胞传代、细胞保存和从低温贮藏状态复苏细胞时都会有重大的凋亡应激反应发生。在这些过程中，不同种类的细胞在细胞生存力上都会发生不同程度的损失。阻止或抵消这些细胞凋亡信号便会给细胞培养过程的进展、稳定性和功能可靠性带来重大改善。

众所周知，血清具有提供营养、抗凋亡及促细胞生长的作用，这些对细胞生存力的保持具有十分重要的意义。尽管如此，甚至在添加有血清的培养物中，剧烈应激反应之后依然会有凋亡现象发生。这种应激反应能够创造一种环境，其中凋亡活性超过内生保护因子抗拒凋亡的能力。添加caspase 抑制剂可以提供更高的保护水平，从而明显提高含血清和血清耗尽两种细胞培养体系的效率、繁殖能力和稳健性。Caspase 抑制剂在瞬间转染和器官切片培养等敏感环境中显得尤为重要。

Apoptame™ F和Q为高浓度的细胞培养添加物，在DMSO 中含被证实的凋亡抑制剂。提供的溶液浓度为 20mM ，按1 ul/ml（1:1000比例稀释）的量加入培养基内防止凋亡。在常规细胞培养、添加新培养基或细胞冻存之前加入添加剂Apoptame™ F和Q。

APOPTAME™ F -第一代细胞凋亡抑制剂

肽－氟甲基甲酮（FMK）类caspase 抑制剂可以有效地应用于体内和体外，它们具有高效力、强细胞渗透性，属于不可逆抑制剂，目前已经广泛用于凋亡研究工作中并已被确定为此领域的基准试剂。体内模型研究发现，无论在诱导凋亡发生之前或之后，用此抑制剂进行处理可以减少组织损伤和成倍提高细胞存活率。

体外细胞研究主要集中在探求凋亡机理和caspase 相互作用。然而现在越来越多的研究转向强调caspase 抑制剂在增进T-细胞、神经元、破骨细胞、造血细胞和胎儿胰腺细胞及其他细胞中组织培养的可靠性和效率方面的潜力。

Apoptame™ F 在DMSO 中含有一种氟甲基甲酮（FMK）抑制剂，可用作细胞培养添加剂或用于阻止冻存细胞复苏过程中凋亡的发生。建议在细胞培养基中以1:1000的稀释度加入此添加物。滤膜过滤除菌， -20℃ 贮存，使用前放到室温（ 18.5℃ 融化）。

APOPTAME™ Q -第二代细胞凋亡抑制剂

第二代保护细胞的新产品推出了一个新型的非FMK结构、广谱的caspase抑制剂，在提高细胞传代效率、稳定性、降低细胞毒性等方面作出了改进。

活化的抑制剂溶于DMSO，是一个小分子量的疏水化合物。建议 20mM 的母液按1:1000的比例稀释后直接加入组织培养基中（1:1000相当于1ul/ml培养基）。建议冰箱内取出的细胞用细胞盘培养后直接添加Apoptame™产品。Apoptame™ Q在 37°C 培养条件下，一直保持抑制活性高达60h。

Apoptame™ Q证实能够抑制重组蛋白Caspases 1, 3, 8,9的活性，其IC₅₀为25 to 400 nM。滤膜过滤除菌， -20℃ 贮存，使用前放到室温（ 18.5℃ 融化）。

产品信息：

Apoptame™ 使用程序：

·验证是否提高冻存细胞复苏率的建议程序：

（1）         至少聚集1x10⁷ 个细胞-足够配制10管1 mL冻存液（10⁶ cells/管）；

（2）         用冻存培养基重悬细胞使其终浓度约为100,000个细胞/ml;

（3）         对照： 1µL DMSO/ml体积的对照组细胞；（建议多做几个平行）

（4）         测试组：1µL Apoptame™/ml体积的待测组细胞，此时Apoptame™的浓度为20 µM；

（5）         根据标准步骤冻存细胞（直接加入液氮或冷冻程序）；

（6）         48h后取出几管对照组和测试组细胞冻存液。

（7）         在合适的三角瓶或培养皿内孵化控制组和待测组细胞，根据实验需要在解冻后的不同时期记录复苏率、细胞活性及生长率。

·验证是否提高细胞活性的建议程序：

对照组：1µL DMSO/ml体积的对照组细胞；（建议多做几个平行）

测试组：1µL Apoptame™/ 2 ml体积的待测组细胞，此时Apoptame™的浓度为10mM；（也可以稀释Apoptame™以 1µL加入4mL培养液，浓度为5µM）。在合适的三角瓶或培养皿内孵化控制组和待测组细胞，根据实验需要不同时期记录细胞活性及生长率。

注意事项：

若Apoptame™以冻干粉形式供应，必须将其悬浮在100%的DMSO溶液中。加入1mg的该产品至100µL DMSO中，配成 20mM 的母液。可以配制更高的浓度。我们曾成功配制Apoptame™ Q母液其浓度高至400mM或者1mg/5µL，但是浓度太高较难处理。

厂家说明：

MP Biomedicals生物医学公司是位于美国加利福尼亚州的知名生命科学和生物技术厂商。2004年底成功收购Qbiogene、ICN，现在全球有5个大型仓库，能够及时供应各行业需求，亚洲仓库位于新加坡。它致力于生命科学领域的基础研究和探索。目前它提供55000多种产品，是世界上能全面提供生命科学产品和临床诊断产品的几家厂商之一。前尘生物为MPbio公司正规代理，提供MP bio公司所有产品的售后服务。