基质胶应用操作指南

基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取出的可溶性基底膜制备物，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等组成，还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。在1980年代中期由丹麦的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分别发现并具体描述基质胶【1】，其主要生产过程是用盐水提取/洗涤肿瘤匀浆后可溶性蛋白质，再用溶剂萃取产物中不溶性复合物，在低温下使用缓冲液进行透析后获得无色到淡黄色溶液。
 
基质胶为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑，也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库，同时可用作为细胞形态发生和分化的信号等。
 

以下结果采用的是翌圣生物开发生产的Ceturegel®基质胶和高活性细胞因子等其他配套试剂试验获取。  侵袭实验及3D培养
     
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引用  [1] Kleinman H K ,  Martin G R . Ceturegel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.
 
附录基质胶使用规范  

Q A如何融化Ceturegel®基质胶，融化需要多长时间？

将Ceturegel®基质胶埋整瓶没在碎冰盒中，再将冰盒置于4℃冰箱中，过夜融化，确保碎冰足量。融化后转动瓶子查看Ceturegel®基质胶是否全部融化，确认无冰晶或胶块残留。我们建议过夜融化，高蛋白浓度的Ceturegel®基质胶可能需要更多的时间。请勿将Ceturegel®基质胶瓶直接放在4℃冰箱中融化，也请勿将冰盒及Ceturegel®基质胶放置在冰箱门上或冰箱靠门的位置。以下图片可供参考：
 


Q A融化后Ceturegel®基质胶状态是如何？

标准型Ceturegel®基质胶融化后应为澄清的液体，无酚红的为澄清且透明；蛋白浓度越高，融化后液体越粘稠。具体请参考下图Ceturegel®基质胶融化后的照片，左边两瓶是高浓度型，右边两瓶是标准型：Q A基质胶如何分装冻存使用？可将冻融后的Ceturegel®基质胶分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。所有涉及到使用的物品在使用前需预冷，使用预冷的移液管、吸头及小管等操作基质胶。
 


Q ACeturegel®基质胶融化时发现有凝胶，融化不了是怎么回事？
Ceturegel®基质胶对温度非常敏感，超过10℃即开始成胶，超过22℃成胶速度会更快。如果到货情况正常，出现此种现象应该是融化操作不规范或者融化期间环境温度升高导致部分凝胶。请一定严格按照融化操作规范执行，确保融化时保持低温环境。Q A如何稀释Ceturegel®基质胶？一般可用预冷的无血清培养基或pH7.4的PBS稀释。由于批次之间的浓度差异，推荐按照特定的工作终浓度稀释，而不要以比例或稀释倍数稀释。Q A使用Ceturegel®时需要注意哪些方面？所有接触Ceturegel®的试剂耗材产品都需要预冷，操作过程应全程在冰上操作，确保低温环境。Ceturegel®对温度十分敏感，一旦超过10℃，即开始凝胶。  细胞因子使用规范  

• 离心：收到的管子内为冻干粉，开盖前要快速离心10000-12000rpm，30s，以便使可能脱落粘附在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。
• 溶解：用说明书上指定溶液进行溶解，溶解浓度控制在 0.1-1.0 mg/mL。注意：不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋，剧烈震荡会造成蛋白失活 可以用枪头轻轻吹打几次助溶，或者室温静置一段时间。
   
• 稀释：稀释可用PBS或者基础培养基溶液，其中需含有0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖备用(确保无菌)，使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液，稀释浓度根据您的使用浓度确定，不要低于10ug/ml。即可分装成小管，冻存在-20—80℃。
   
• 使用：使用时取用一支冻存的细胞因子，加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。

 客户使用引用文献-基质胶【1】Wang Z, Wang Q, Chen C, Zhao X, Wang H, Xu L, Fu Y, Huang G, Li M, Xu J, Zhang Q, Wang B, Xu G, Wang L, Zou X, Wang S. NNMT enriches for AQP5+ cancer stem cells to drive malignant progression in early gastric cardia adenocarcinoma. Gut. 2023 Mar 28:gutjnl-2022-328408. doi: 10.1136/gutjnl-2022-328408. Epub ahead of print. PMID: 36977555.   IF31.793
【2】Luo K, Gao Y, Yin S, Yao Y, Yu H, Wang G, Li J. Co-delivery of paclitaxel and STAT3 siRNA by a multifunctional nanocomplex for targeted treatment of metastatic breast cancer. Acta Biomater. 2021 Oct 15;134:649-663. doi: 10.1016/j.actbio.2021.07.029. Epub 2021 Jul 18. PMID: 34289420.  IF19.92
【3】Zhao Y, Lu T, Song Y, Wen Y, Deng Z, Fan J, Zhao M, Zhao R, Luo Y, Xie J, Hu B, Sun H, Wang Y, He S, Gong Y, Cheng J, Liu X, Yu L, Li J, Li C, Shi Y, Huang Q. Cancer Cells Enter an Adaptive Persistence to Survive Radiotherapy and Repopulate Tumor. Adv Sci (Weinh). 2023 Mar;10(8):e2204177. doi: 10.1002/advs.202204177. Epub 2023 Jan 19. PMID: 36658726; PMCID: PMC10015890.  IF9.0