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翌圣生物（Yeasen）
试剂/耗材
已认证品牌介绍
Sino Biological
抗体/蛋白质/抗原/多肽
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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
入驻年限：19 年
- 联系人：
翌圣生物
- 所在地区：
上海
- 业务范围：
体外诊断、耗材、技术服务、抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、试剂
- 经营模式：
生产厂商
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公司新闻/正文
DNA-蛋白质互作研究解决方案（下）
614 人阅读发布时间：2023-10-25 17:46
DNA-蛋白质互作研究解决方案（上）介绍了一些表观组学技术研究DNA-蛋白质互作，但是有了组学数据，通常还需要一些验证实验。
这次，我们来介绍DNA与蛋白质互作研究的验证实验。
01 双荧光素酶报告检测实验
荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。
双荧光素酶实验能够进行启动子活性检测、转录因子鉴定、miRNA 与LncRNA/circRNA/mRNA互作等。
实验步骤
性能展示
图.转录因子IRF3对IFN-β启动子的调控作用
构建Luc-IFN-β启动子载体和IRF3的过表达载体后进行共转染实验，之后双荧光素酶报告基因检测显示转录因子IRF3对IFN-β具有调控作用
产品推荐
| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
11402ES60/80 |
100 T/1000 T |
| Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒 |
11401ES60/76/80 |
100 T/500 T/1000 T |
| pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照 |
11556ES03 |
1 μg |
| Luciferase Reporter Plasmid negative control （荧光素酶报告基因质粒阴性对照） |
11555ES03 |
1 μg |
| pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海肾荧光素酶报告基因质粒） |
11558ES03 |
1 μg |
02 CoIP或GST-pull down CoIP或GST-pull down是研究互作蛋白的技术。在DNA-蛋白质互作研究时，通常会发现，在调控DNA区域，会出现多个蛋白共结合的情况，此时可能是蛋白质不同亚型或者不同蛋白组成复合体后发挥调控功能。这种情况下，需要进行湿实验验证，CoIP或者GST－pull down是使用较多的技术。
酵母双杂交是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
| CoIP |
GST-pull down |
酵母双杂交 |
|
| 原理 |
抗原抗体特异性反应 |
GST对谷胱甘肽偶联磁珠得特异性 |
真核生物转录调控过程 |
| 检测瞬时相互作用 |
否 |
否 |
是 |
| 检测弱相互作用 |
否 |
否 |
是 |
| 检测直接相互作用 |
否 |
是 |
否 |
| 验证方式 |
体内直接或间接相互作用检测 |
体外直接得相互作用检测 |
体内直接或间接相互作用检测 |
| 是否需要蛋白纯化 |
否 |
是 |
否 |
| 是否需要抗体 |
是 |
否 |
否 |
产品步骤
CoIP实验步骤
GST-pull down实验步骤
酵母双杂交实验步骤
| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| 蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 |
36403ES03/05/08/25/60 |
1/2/5/25/100 mL |
| 蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂 |
36404ES08/25/60 |
5 /25 /100 mL |
| 蛋白A/G免疫沉淀磁珠 |
36417ES03/08 |
1/5 mL |
| GSTSep Glutathione MagBeads GST标签蛋白纯化磁珠 |
20562ES03/05/08/25 |
1/2/5/25 mL |
| X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 |
10903ES25/60/72/76 |
25/100/250/500 mg |
| Aureobasidin A(AbA) 金担子素A |
60231ES03/08/10 |
1/5/10 mg |
| WB/IP裂解液 |
20118ES60 |
100 mL |
| 蛋白酶抑制剂Cocktail |
20124ES03/10/60/76 |
1/10/100/500 mL |
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