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翌圣生物科技（上海）股份有限公司品牌商
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翌圣生物（Yeasen）
试剂/耗材
已认证品牌介绍
Sino Biological
抗体/蛋白质/抗原/多肽
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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
入驻年限：19 年
- 联系人：
翌圣生物
- 所在地区：
上海
- 业务范围：
体外诊断、耗材、技术服务、抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、试剂
- 经营模式：
生产厂商
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公司新闻/正文
宫颈癌类器官构建实用宝典
250 人阅读发布时间：2024-07-19 11:15
2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四价HPV疫苗上市申请获得NMPA受理，这也是国内自研四价的预防因人乳头瘤病毒所引起的宫颈癌疫苗。根据国家癌症中心基于肿瘤登记及随访监测数据，在JNCC上发布2022年中国恶性肿瘤疾病研究情况显示【1】，子宫颈癌位列女性癌症发病人数的前五位，发病增长率仅次于甲状腺癌，因此防治需要同时进行，以减少病人发病率和延长存活期。
图.信息源自CDE官网
宫颈癌类器官（organoids）是指利用宫颈肿瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。宫颈癌类器官可以作为疾病模型，相较于传统2D疾病模型，其在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近，能作为宫颈癌治疗、诊段和发病机制研究的理想试验模型。
宫颈癌类器官构建实验步骤
1、取材：标本离体后，尽快取材。采用无菌器械，保证无菌环境，将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的 15 mL 离心管中，4℃转运；
2、清洗：在生物安全柜中取出样品管，去除组织保存液，加入适量冷的添加有双抗的 PBS，反复清洗后，去除 PBS；
3、重复清洗：重复第 2 步骤 3 次；
4、组织处理：去除 PBS缓冲液后，将组织块移至10 cm含10 mL冷原代 组织保存液的无菌培养皿中，用无菌眼科显微剪将组织剪碎（直径约 0.5mm~1mm）；
5、重复清洗：使用常温PBS，重复第2步骤3次；
6、收集组织碎片，加入组织消化液消化20~30 min，过70 μm筛网，收集宫颈癌细胞；
7、红细胞裂解：加入10 mL红细胞裂解缓冲液，室温下在翘板摇床上摇10 min；
8、重复清洗：裂解完毕，使用常温 DMEM/F12，重复第 2步骤3次；
9、类器官种板：调整细胞密度为2~3×106，与基质胶1:1均匀混合，将细胞混悬液以40-60 uL每孔种在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入预热的类器官培养液，每个孔 750 uL；
10、类器官培养：将培养板放在 37℃ CO2培养箱培养,每2天更换培养液。加入培养液时，吸头朝向侧壁，缓慢加入；
11、类器官观察：每天观察类器官并拍照，了解初始类器官数量、增殖速度、形态、微生物污染情况等。
实验结果
注：P为代次，d为培养天数
FAQ
所有操作需在无菌环境下进行，应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。
①取材时尽量保证无菌取材；
②提取前可以用含双抗的PBS浸泡几分钟：常见与外界环境有接触可能的胃、肠、膀胱等位置肿瘤建议用含3%~5%双抗的PBS浸泡5-10 min，其他常见肿瘤用含1%~2%双抗的PBS浸泡5min左右；
③提取细胞过程中所用试剂均加1%双抗及合适浓度的原代抗生素。
尽可能多采集肿瘤细胞含量高的肿瘤组织，并缩短组织样本在空气中暴露的时间，以减少污染概率；采集的肿瘤组织样本尽快置于装有专用样本保存液的无菌管中，低温（4 ℃左右）下快速运转至检测单位（尽量保证采样后2~4 h内送到）。
有差别，肿瘤本身具有异质性，不同来源的类器官之间存在差异是很常见的现象，从形态上看，原发病灶来源的类器官比癌旁来源的类器官更具有侵袭性的结构，一般病灶形态上更加不规则一些。如果希望在建模或药物筛选方面尽量减小误差，可以在活性好的地方多位置取样。
产品选择
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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Cebrary®Tissue Digestion Solution 组织消化液 |
41423ES10/30 |
10/30 mL |
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Cebrary®Cell recovery solution for Organoid类器官回收液 |
41421ES30/60 |
30/100 mL |
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Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液 |
41422ES30/60 |
30/100 mL |
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产品类型 |
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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基本浓度 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 |
40183ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
40184ES08/10 |
5/10 mL |
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低生长因子 |
Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基质胶 |
40185ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
40186ES08/10 |
5/10 mL |
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高浓度 |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基质胶 |
40187ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
40188ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基质胶 |
40189ES08/10 |
5/10 mL |
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干细胞专用 |
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基质胶 |
40190ES08/10 |
5/10 mL |
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类器官专用 |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
40191ES08/10 |
5/10 mL |
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鼠尾胶原 |
Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I |
40125ES10/50 |
2/10 mL |
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Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾胶原蛋白I型 |
40136ES10/50 |
2/10 mL |