宿主gDNA、试剂背景核酸污染去除只需一款Thermolabile dsDNase！

在诊断或研究由病原感染引起的疾病时，当前的检测方法大多针对病原体的基因组进行诊断。然而，仅依靠检测病原体的基因组核酸只能确认病毒的存在，不足以反映持续感染或整合入宿主基因组的风险。例如，人乳头瘤病毒（HPV）DNA的检出可能只是一次性感染，不代表持续病变或癌变风险。相反，检测HPV E6/E7 mRNA水平能提供更精确信息，评估HPV在宿主体内的基因组整合、转录活性及持续感染和致癌可能性。这种方法更关注“病变”而非仅仅是“感染”，有助于识别可能进展为浸润癌的癌前病变，避免对一次性HPV感染及其良性病变的过度探查和不必要治疗。

图1：HPV病毒感染宫颈细胞示意图

为确保基因mRNA表达量分析的准确性，必须排除样本中基因组DNA（gDNA）的干扰，因为其存在可能导致mRNA定量结果的误差，有效去除mRNA样本中的gDNA一直是一个技术难题。目前，DNase I是主流用于去除gDNA的酶，但DNase I的灭活需要在体系中额外加入EDTA，容易导致后续扩增反应受抑制。

翌圣Thermolabile dsDNase

针对以上问题，翌圣生物推出了一种热敏双链DNA特异性核酸酶——Thermolabile dsDNase。该酶能够选择性地降解双链DNA，而对单链核酸分子几乎没有影响。通过裂解双链DNA中的磷酸二酯键，生成带有5'-磷酸和3'-羟基末端的寡核苷酸片段。更重要的是，该产品具有热敏感性，在65°C条件下可以迅速失活。相比传统的DNase I，Thermolabile dsDNase更适合快速去除基因组DNA，并且与RT-PCR反应缓冲液兼容，因此可以直接应用于RT-PCR/qPCR等过程中，以清除gDNA污染，从而提高反转录效率。

图2. Thermolabile dsDNase去除gDNA示意图

产品特点

• 高效：只需37℃ 5 min即可消化1 μg基因组DNA；
• 纯度高：蛋白纯度≥99%；
• 无RNase酶残留：对样品中RNA无影响；
• 热敏感：65℃加热10 min即可快速失活，无需纯化，gDNA去除与逆转录反应可在同管内完成；
• 应用广泛：RNA提取或反转录实验前去除gDNA、分子诊断试剂原料中背景菌gDNA污染去除。

性能展示

1. 纯度高：蛋白纯度≥99%

图3：SDS-PAGE法检测14544ES蛋白纯度结果

2. 无RNase酶残留：对样品中RNA无影响

图4：20 μL反应体系中加入20 U来自进口厂家A、进口厂家B和翌圣3批次Thermolabile dsDNase，同时分别加入0.5 μg 293T RNA，37℃孵育4小时。琼脂糖凝胶电泳结果显示，翌圣3批次Thermolabile dsDNase组RNA谱带与阴性对照一致，进口厂家A和进口厂家B组RNA条带有轻微降解，说明翌圣3批次Thermolabile dsDNase中无RNase残留，对样本中RNA无影响。

3. 热敏感：65℃加热10 min即可快速失活

图5：Thermolabile dsDNase热敏感性验证结果图。阴性对照组：未加dsDNase酶；阳性对照组：反应体系中加入0.2 U来自进口厂家A、进口厂家B和翌圣3批次Thermolabile dsDNase；热处理组：反应体系中加入20 U来自进口厂家A、进口厂家B和翌圣3批次经过65℃加热10 min处理的Thermolabile dsDNase酶。然后，分别在体系中加入1 μg小牛胸腺DNA，37℃孵育5 min。琼脂糖凝胶电泳结果显示，0.2 U Thermolabile dsDNase可消化1 μg小牛胸腺DNA，Thermolabile dsDNase经过65℃孵育10 min可完全失活。

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参考文献

1. Ndiaye C, Mena M, Alemany L, et al. HPV DNA, E6/E7 mRNA, and p16INK4a detection in head and neck cancers: a systematic review and meta-analysis[J]. The Lancet Oncology, 2014, 15(12): 1319-1331.
2. Broccolo F, Fusetti L, Rosini S, et al. Comparison of oncogenic HPV type‐specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples: results from a multicenter study[J]. Journal of medical virology, 2013, 85(3): 472-482.