基质胶应用(3)—细胞侵袭实验

首先将拿到的Ceturegel^®基质胶冻融后按照原液1:8稀释（终浓度不要超过3 mg/mL）来包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30 min - 8 h使基质胶聚合成凝胶，使用前用无血清培养基进行基底膜水化30 min。

将细胞饥饿12 - 24 h以去除血清的影响。

消化细胞，终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1 - 2次，用含无血清培养基重悬调整细胞密度至4×10⁴~5×10⁵个/mL 。。

取细胞悬液100 μL加入Transwell小室。

在24孔板下室加入600 μL含20%FBS培养基，添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡，产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。

培养细胞:常规培养12 - 48 h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。

取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用不含钙的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定10 - 30 min，将小室适当风干。

使用0.1%结晶紫染色5 - 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍于显微镜下随即5个视野观察细胞，记数。