- 详细信息
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现货
- 英文名:
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)
- 保质期:
一年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10T(11150ES10)/100 T(11150ES60)
| 规格: | 10T(11150ES10) | 产品价格: | ¥285.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100 T(11150ES60) | 产品价格: | ¥1395.0 |
产品描述
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)是基于Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)开发的快速反转录试剂盒,适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)相比,具有稳定的检出率、特异性、产量保证,且反转录总时长最快可低于6分钟,大大缩短了实验时间。
该试剂盒包含gDNA Digester Mix,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6和Oligo (dT)18,用户可根据需要,选择Random Primers N6,Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为反转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
| 11150ES10(10 T) | 11150ES60(100 T) | ||
| 11150-A | 4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA Digester Mix | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Random Primers (50 μM) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primers (50 μM) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | RNase-free Water | 200 μL | 1 mL* 2 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期12个月。反转录产物可立即用于后续反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
| 组分 | 使用量 |
| RNase-free H2O | To 10 μL |
| 5× gDNA Digester Mix | 2 μL |
| Total RNA | 10 pg -5 μg* |
| or mRNA | 10 pg-500 ng* |
2. 反转录反应体系配制(20 μL体系)
| 组分 | 使用量 |
| 上一步的反应液 | 10 μL |
| 4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primers(50 μM) | 2 μL |
| or Random Primers (* for qPCR)(50μM) | or 2 μL |
| RNase-free Water | To 20 μL |
【注】:1)引物投入量可根据模板投入量调整,如果反转录产物用于qPCR实验,可在体系中按推荐量添加Random Primers。
2)建议先加入4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) 混匀后再加入反转录引物,以保证引物不受gDNA Digester影响。
3)体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。
3. 反转录程序设置
| 温度 | 时间 |
| 55℃ | 5 min |
| 85℃ | 5 s |
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 反转录反应体系配制(20 μL体系)
| 组分 | 使用量 |
| 4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primers(50 μM) | 2 μL |
| or Random Primers (* for qPCR) (50μM) | or 2 μL |
| Total RNA | 10 pg -5 μg |
| or mRNA | 10 pg - 500 ng |
| RNase-free Water | To 20 μL |
2. 反转录程序设置
| 温度 | 时间 |
| 55℃ | 5 min |
| 85℃ | 5 s |
【注】:1.建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低,可增加投入量至最多5 μg Total RNA。
2.引物投入量可根据模板投入量调整,如果反转录产物用于qPCR扩增实验,需在体系中添加Random Primers。
3.对于高GC含量模板或者复杂模板,可将反转录温度提高到60℃。
4.本产品可合成14 kb以下的cDNA序列,如需得到更长的cDNA产物,可适当延长反转录时间。
注意事项
1)所有操作均应在冰上进行,且操作过程应避免RNase污染。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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