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分子级别海藻糖(Trehalose)的特点及在分子实验中的应用

1914 人阅读发布时间:2017-05-04 13:38

海藻糖 Trehalose
                                    ——高效的酶稳定剂
    为提高含高GC含量或连续多个A/T的复杂基因的PCR扩增效率及扩增特异性,科研人员通常会尝试在PCR反应体系中添加增效剂。翊圣生物现为广大科研人员提供质量高、适用性广的两种PCR增效剂:甜菜碱与海藻糖。
其中,海藻糖(Trehalose)是一种双糖,能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜,有效的保护生物分子结构不被破坏,从而维持生命体的生命过程和生物特征。翊圣生物提供的海藻糖,为海藻糖水合物,分子式为C12H22O112H2O,纯度≥99%,金属离子含量低,可用于分子生物学实验。

产品介绍
    翊圣生物是在工具酶及其反应辅助试剂方面极具经验,确保原装进口高品质海藻糖,并大量现货,可保证批次间产品的稳定性。该产品可作为酶保护剂,用于DNA聚合酶、逆转录酶等工具酶的稳定剂,因此作为PCRRT-PCRqPCR等实验反应优化的添加剂成分,大大改善扩增效率和扩增特异性、改善逆转录效率等。

海藻糖特点
1. 海藻糖具有热稳定性和热激活特性。海藻糖在蛋白热变性过程中可维持蛋白的骨架,保持其天然结构。在分子生物学多种酶促反应中得到验证,如逆转录酶参与的cDNA合成,Dnase I参与的DNA降解,限制性内切酶的酶切反应等[1]
2. 海藻糖可作为PCR增强剂。通过降低DNA双链融解温度,维持Taq DNA聚合酶稳定性,提高PCR反应效率[2]
3. 海藻糖可中和抑制剂对DNA聚合酶的抑制作用,维持PCR扩增效率。海藻糖作为
SYBR Green I法实时荧光定量PCR添加剂,有效降低SYBR Green I对PCR的抑制[3]
4. 海藻糖可作为珍稀样本基因组或极低浓度基因组的保存剂[4]
新闻图片1
图1. 海藻糖可保护Taq DNA聚合酶酶活性,提升PCR扩增性能
数据来源DOI: 10.1373/clinchem.2004.031336 Published June 2004

主要应用
1. 作为酶稳定剂,维持酶的活性及热活化后的酶活性。
2. 可应用于DNA的测序反应实验中,提升含有重复序列(连续多个A或T)的测序精准性
3. 复杂模板的PCR扩增,如高GC含量的样本。
4. 适用于较长cDNA的逆转录反应,尤其是全长cDNA的合成,提升文库建立的覆盖度
5. 微量DNA样品保存剂
6. qRT-PCR反应体系添加剂,提升反应性能。

溶液配制
溶于水。50mg/ml。

海藻糖参数
中文别名(Chinese Synonym) α,α-海藻糖,α-D-吡喃葡萄糖基-α-D-吡喃葡萄糖苷
英文别名(English Synonym) alpha-D-Glucopyranosyl-alpha-D-glucopyranoside; Mycose
CAS 号(CAS NO.)
6138-23-4
分子式(Molecular Formula)
·         C12H22O11 2H2O
分子量(Molecular Weight)
·         378.33g/mol
外观(Appearance) 白色或灰白色粉末
溶解性(Solubility) 溶于水
纯度(Purity) ≥99%
结构式(Structure) 新闻图片2

参考文献
[1]. Butler SL,Falke JJ. Effects of protein stabilizing agents on thermal backbone motions: a disulfide trapping study. Biochemistry.1996 Aug 20;35(33):10595-600.
[2]. Spiess AN,Mueller N,Ivell R. Trehalose is a potent PCR enhancer: lowering of DNA melting temperature and thermal stabilization of taq polymerase by the disaccharide trehalose. Clin Chem.2004 Jul;50(7):1256-9.
[3]. Horáková H.1,2-propanediol-trehalose mixture as a potent quantitative real-time PCR enhancer.BMC Biotechnol.2011 Apr 18;11:41. doi: 10.1186/1472-6750-11-41.
[4]. Smith S,Morin PA.Optimal storage conditions for highly dilute DNA samples: a role for trehalose as a preserving agent.J Forensic Sci.2005 Sep;50(5):1101-8.

相关链接

甜菜碱在分子生物学实验中的应用可参看:甜菜碱专题链接

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